home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9410p.zip / M94A3317.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-10-25  |  3KB  |  53 lines
  1.        Document 3317
  2.  DOCN  M94A3317
  3.  TI    The microtiter point mutation assay to detect drug resistance in
  4.        HIV-seropositive patients treated with AZT.
  5.  DT    9412
  6.  AU    van der Feltz M; de Haas C; de Graaf L; Borleffs JC; Visser MR; Verhoef
  7.        J; University Hospital, Dept. of Internal Medicine, Immunology and; Inf.
  8.        Dis., Utrecht, The Netherlands.
  9.  SO    Int Conf AIDS. 1994 Aug 7-12;10(1):103 (abstract no. PA0032). Unique
  10.        Identifier : AIDSLINE ICA10/94369258
  11.  AB    BACKGROUND: After prolonged therapy of HIV-seropositive patients with
  12.        zidovudine (AZT), drug resistant virus strains emerge. Five point
  13.        mutations of the viral reverse transcriptase are responsible for various
  14.        degrees of drug resistance. A rapid, simple method to detect the
  15.        proportions of wild type and mutant sequences in a patient can be of
  16.        significant value to evaluate the benefit of long term treatment. It can
  17.        also be of value in clinical trials with new antiretroviral drugs to
  18.        screen for rapidly appearing point mutations causing resistance.
  19.        METHODS: The microtiter point mutation assay according to Kaye et al.
  20.        (J. of Med. Vir. 1992) was used. A double stranded biotinylated PCR
  21.        product is captured on a streptavidin coated microtiter well and
  22.        denatured to a single strand. A probe with its 3' end one base upstream
  23.        of the point mutation under analysis (X) is annealed and a single
  24.        labelled dNTP (Y) is used to extend the probe if Y is complementary to
  25.        X. The extended probe is denatured away from the target and added to a
  26.        scintillation cocktail for counting. Wild type and mutant strain
  27.        percentages can be calculated. Fourteen pairs of patients' samples were
  28.        tested in the assay: one sample before the use of AZT, the other one
  29.        after approximately one year's use of AZT. Samples of a chronically
  30.        infected cell line containing a wild type sequence (pre A012) and one
  31.        containing the five mutations (post A012) were used as controls. All
  32.        assays were performed in duplicate. RESULTS: At codons 70 and 215, a
  33.        shift from predominantly wild type strains (less than 15% mutated
  34.        sequences) to a mixture of wild type and mutant strains (30-100% mutated
  35.        sequences) appeared in the majority of the patients' samples after one
  36.        year's treatment with AZT. At codon 67 and 219, the wild type strain
  37.        persisted after therapy in all but 2 patients. At codons 41, the
  38.        proportion of mutant strains increased after treatment. Our results are
  39.        in agreement with the literature in which codons 70 and 215 have been
  40.        described to mutate rapidly after commencement of therapy. CONCLUSION:
  41.        The microtiter point mutation assay is a rapid and simple method to
  42.        screen for point mutations causing drug resistance and to quantitate the
  43.        proportion of mutated viral sequences.
  44.  DE    Drug Resistance, Microbial/GENETICS  *Genetic Techniques  Human
  45.        HIV/*DRUG EFFECTS/ENZYMOLOGY/*GENETICS  HIV Seropositivity/*DRUG
  46.        THERAPY/*MICROBIOLOGY  *Point Mutation  Polymerase Chain Reaction
  47.        Reverse Transcriptase/GENETICS  Time Factors  Zidovudine/*THERAPEUTIC
  48.        USE  MEETING ABSTRACT
  49.  
  50.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  51.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  52.  
  53.